Nuevas aportaciones sobre modelos de fosfatasadiálisis de la fosfatasa renal.

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«KVAS APORTACX C8R8 SOBHK XOXSIXtS 1 8 FOSFATABA DIALISIS DB LA FOSPATASA RXXAl

2 S -Z 6 S M q .g 3 .3 8 ^ 0 0 9 3

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE - MABRID Facultad de Ciencias Químicas B I B L I O T E C A Ne Registro

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ProQ uest N u m b e r: 10291740

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uest ProQuest 10291740 Published by ProQuest LLC(2017). C opyright of the Dissertation is held by the Author. All rights reserved. This work is protected against unauthorized copying under Title 17, United States C o d e M icroform Edition © ProQuest LLC. ProQuest LLC. 789 East Eisenhower Parkway P.O. Box 1346 Ann Arbor, MI 4 8 1 0 6 - 1346

>1 presenta t n t i j i

m

lia

l l m i t i n to en «1 Separtfc asóte 4* t e b l n O n fa ia d d In stitu to ‘AIu m h ite % W je le d ireeelln del Profesar X» I*era Taneye* e «jalen ex» p n w a l agradeslatente a le profunde* Aafaleao» al reeoaoctabg te a le Real Anadéala de etee Anatas» H ateas y X a* ralee y a l Oeaaeje >a»erler de Z areetlfaeieaee C lentíft* eaa yor la ayada eeenfatee * tea ae fea prestada daraate la real 1sa etía d el a ln a *

XOTTAS APQRYACIOHSS SOBRE MODKLOS

m FOSFATABA

D IALISIS SE U TOSTATASA SEXAL

Xl estudio p resen te f u l i n ielad o como una eontlnuaeidn do loo que Tenían realizán d o se on e sto la t e r a to r io «oteo % doloo do fo s fa ta o s y on o l aapooto do prefear l a in flu e n c ia que sofero loo to o ta aquí roeonooidoo podían e jo ro o r dito»» oao sustancias* XI e r ito r io on la elo eeid n do lo to s toferá do e o ta r on oacoger proel sámente aqudfteo que sofero la fo s fa ta s a sil ama tafeían profeado on mayor o menor grado su a e tlrid a d * Asi dojt taeafean inmediatamente dos poalfellidadea do o stu d lo t a c a lla da le —a i t f l l i w

y a a a lfa da aalnodcldoa. d lfaran eiaad a -

aquí la In d iv id u al de l a t e e y la de lea mianea eon le e loaee del prim er grupo do experiencias» l a o rie n ta c ió n que en eada uno do lo s casos so fea segqL do r a r e fle ja d a on la p a rte te ó ric a co rresp o n d ien tej pero * s in ru p tu ra do l a lín e a re c to ra del t r a t o jo f feufeo que in te x c a la r on d i una s e rio de ex p erien cias sofero la fo s fa ta s a n a l9 por feafeor sido feecfeas h a sta aquí solamente sofero la do origen ¿seo* y s e r de in te rd s conocer su comportamiento px& c 1sámente eon l a s mismas su sta n c ia s que habíamos de emplear despulo junto a lo s modelos*

* 2 »

Z* im precisión de le s re su lta d a s y la c r í t i c a comparada da la conseguido b a sta aquí an l a c a ra e ta ris a e lá n da eefeg * asistas (B abidraeast carb o x ilasas# ate*)# resp ecto da la s la» ▼ estigaelones sobas Bedeles# nos asonsajan an a s ta panto da l a labor» d i r i g i r n a s s tra a te n e lín p re fe re n te b a sta a l posi* M« a n á lis l» 4*1 propio fernonto ( P K lla ia ém

fo « f« ta— L

oono medio mejor da i r después# s in empirismos» a la erasd&s da modelas que puedan ad ap tarse mejor a la realidad# S ata aJt jetlTO se empleas a eum plir an la te r s a r a p a rta da la f**ie# cuya d iv isió n an la s t r e s apartados s ig u ie n te s queda j u s t i f ¿ aada an la que preceda* 1*- Acolín da iones m e tille e s sobre modelos da fo sfa ta » •a* 2** Acolín da aminoácidos# so lo s y eon iones m etálicas» sobra modelas da fo sfa ta sa # 3 .- D iá lis is da l a fo s fa ta s a renal*

i #. Accxog m io se s m b tau co s scehk kos& ios « fo sfa ta b a

* PABgE TEORICA *

Xn la ototanalln da moda loa da a s ta ra a a da la a qua lo a fo afataaa* aon an eaao p a rtic u la r# bafeía da eonaldararaa * Junto a l grupo a lo o b lllo o a l grupo andn©# qua in tarfaitd rJat o ano o atallaad o raa an la M d ro lia la da an d a ta r aagun a l aj, quana a ig a ia n ta t R - C 0 ’ 0 - C H 2- R + H 2 N - X “► P - C O - N H X + R - C H 20H R - C O - N H X + HOH

P - C O O H + NH2X

R - C 0 * 0 - C H 2- R + H O X - * - R - C O ’ OX + R - C H 2 0 H R - C O ' O X + HOH

R - C O O H 4- XOH

T tratán d o se da a a ta ra a f o a f lr ie o a an a l eaaa da ta ta » l i s a dora a eon ftm o lln a lc a h é lic a y an fn ie at

•

4

•

La e le a e ié n da la a grupas *OH y »XBg como agrupamien» to s IftipJiftlBdPte t t tt l f f l l aa J u s t i f i c a plenamente an la a ts& bajo s da Lera y Sagoria ( l ) y Lara y B ailada (2)# Coincidan e s ta s predicciones te ó ric a s eon reau ltad o s • obtenida* an ex p e rien cias da in h ib ic lé n an fo a fa ta a a a da 4 , ▼araos orígenes (in te a tin o # buceo» riftén ato»)# S alara y King (s ) asignan a l a enslma vm c a rá c te r da basa débil# amina arom ática o aminoácido# y 6ould U ) enonexi i r a in activ acio n es por eatanas» Cg%XCO» XOgX y XGBD» l a que in d ia s la necesidad da nn grupo omino» posiblem ente da l l a t na# y aun la e x is te n c ia da -OH fe n élio o lib ra » Ib ste rie rm q i ta Baeaari y Auri sabio (s)# (d )» estu d ian también l a impertao, c ia da la s grupos -XBg l i b r a s an la aocién da l a fo s fa ta s a éeid af tratan d o e l etrcima can XqgE# GBgO y CgXglCO y d ia l i* salido pestariorm anta comprueban qua aun an la e sc a la aleal¿, na la fo s fa ta s a so inhibe por la ausencia da •XEg lib ra s» loaba» X» Tan Tbeai y Hogar (7) d escrib an l a in activ a»

(1 ).* Anal»da F is»y tuim» 59» 582» 1945» (2)»» Anal»de tis » y Ruin» 41» 818» 1945» (SÍ*- Bioeb.X» 57» 547» 1954» ( 4 ) , - J»Biol»0bem» 156» 565» 1944» (5)#* Bol»8oc.ttal»Blol»8per»22»559» 1946» (6)»- Bol»Soc»ital»Biol»spar»22» 49» 1946» (7)*- Bioeblm»Biopfays« Acta 1» 61» 1947»

* t •

a lta X» 6% 849, 1244, 1»84| te» 894, 1944, U ),* lora y Peneque, Anal, Vis, y Qata, 41, 894, 1948,

• 7 -

Un má» amplio d e s a rro lle del tra b a jo ba da llo ra r» » » a l ensaye da nuevo» « « q a e i t i i i a» la a qua esto» grupa» * aa»aidarado9 samo a c tiv e s , fíg a r o s as e s tru c tu ra s moleeu» la r e s más compleja» que paodan r e f o r s a r aa aeei érn* Sernas da a a ta d ia r a l incremente da la a c tiv id a d da la a grapa» * ln lflla la e n te aotlT oa por adaoaadoa grapa» a c tiv a n te » que han da a» r o b jeto an cada eaao da una In v e s tig a d én s ls tjt a á tla a i P^ro an o ato aaao da laa fo a fataaa » bay qua baaar in te r v e n ir eoao coadyuvante» aa p aeialaa da la a aodalaa »£ g ln ie o s , determinada» o lamento o m e tílic a » que ban dame», « irad o desempeñar an aquella» un im portante papal* l a a c t i v a d da por magnaala da la fesfO M neeatersaa * a la a lin a da diverso» drganoa f u l e s ta b le c id a p a r fc ib a w n ( l ) y ¿sim ar y Xay ( 2 } y comprobado despaja por numerases experim entadores, In clu so no eo tras mi amo» en la a preparóte do» da fo sfata» » ra n al obtenido» segln la tlo n la a da

*

bar» (3)# Otro» r a r i o» lena» m etílico » Un* Zn, C»# F e, ata* y an alguno» aaao» también a l magnaala ban demostrado ajar* c a r acciona» v a ria b le » sobre la a c tiv id ad da le fo s fa ta s a an resu ltad o » francamente e en tre d i ota rio » aagén la natuifc la s a dal preparado y a l grado da puras» an é l alcansado* ( 1 ) .- Z* p b ieio l* Cb*f 172, 182, 1927* (2 )#. J . Biol* Cbam. 93, 735, 1931* (3)*- Hoppa*8ayl« Z* 232, 165, 1935*

• 8 m

Rosal ( l ) encuentra ac tiv a c io n e s da fo s fa ta s e la a a * p or lan as magnesia aún a pequeñas co n cen trasi anas (0,002JÉ) sobre a l g lic e ro fo a fa to s ld ic e f a l a a la io a Igual caneen* t r a a i l n a ja re a una pequeña paro d e fin id a a e e iln in h ib id a* r a | observándose también p a r Q a rtie r y Blmonart ( 2 ) l a aa» tlv a e lln * in vive* por a l nagnesis da la fo s fa ta s a a le a li* na d al huesa# Belufeerg ( 3 ) demuestra aparando eon fo s fa ta s e la ta s * t i n a l qua la veleeldád da h id r ó l is is sobra a l g lle e ro fe sf& to no es afaetad a por a l magnesia* Gedrangole y Sagas (d) basan e x p e rla n sia s da e stiv a * eid a por magnesio da fo s fa ta s e s a le a lin a s an la s Irganos y an la s preparados de a n sia s definiendo la s a i» da sanean* t r a e i l n d a l magnesia an la cu al a ja r e s su aeeiln # K» ▼* Ü r i (5) en ensayos eos fo s fa ta s a da r if iln , h í­ gado y cerebro concluya qua a l tiempo da e x tr a e s ! la y edad de la s e x tra c te s a fe c ta a la a c t i v a d l a por a l m agnesio, * atribuyendo esto s a fe c to s a la v a r la e lla en in h ib id o re s

a

impuresas an a l e x tra c to a le qua a cambios an la fo s fa ta s a misma*

(l)« * Bull* Boa* i ta l* B iel# 8 , 1714, 1038* {2 }** Compt* Band* 8oc* B ial# 140, 303, 1048* ( 3 )** Biechan* 2« 270, 154, 1035* ( 4 )** Areh. Bal* B io l* , 23, 504, 1037* (5)** Z* Bhyslal* Chem. 254, 117, 1038*

* 9 *

Bocha y Tan Tbeai ( l) « ti Usando e x tra c te » da añacea i n t e s t i n a l , encuentran una fu e rte a e tiv e e ié n p er m agnisie, manganeso y a a la ia y una in h ib ic ió n p a r c ia l par lee iones Fe y Za, colee o en p resen cia de dichas Xg, X**, , Gaf

la s

mismos au to res ( 2 ) definan e l Zn como a c tiv a d o r de la fas* f a ta s a a lc a lin a d a l suero humano normal» Atfn mis que la fo s fá ta s e a lc a lin a , as activ ad a por a l magnesia la fo s fa ta s a deida da la s b a c te ria s d al grupo ti* fo -p a ra tífie © segdn X» Bagat y T ittu (s)* Segdn Lundquist U ) , la fo sfa ta sa de ida p ro s té tic a as in h ib id a por a l cine» Xaganna y Xarayana (5) afirm an que la p iro fe s fa ta s a * de e r it r o c it o s a s ac tiv ad a de 60 a 100 veces por e l magna* sio a concentraciones 0,02*0,08 X siendo a su ves in h ib id a por la s s e le s de co b ra, p la ta , m ercurio y cin e a co n sen tí* eidn 0,0002 X, necesitando é s ta s e r aumentada an e l casa * de h ie r r o , c o b a lto , manganeso, c a lc io y bario* Asimismo le es también l a p iro fo e fa ta s e dal hígado segdn O raanstein, • C árter y X eutbardt ( 6 ) , (1 ) . - Compt, Xend, Soe* B lol», 138, 49, 1944» ( 2 ) ,- Compt» Xend* Sos* B lo l» , 140, 632, 1946* ( 3 )** Compt» Herid,Aced» 8 c i, 224, 864, 1946* (4)*« Acta* Fhyeiel» 8eand* 13, 322, 1947» (5)** J* Biol* Chem» 174, 501, 1948* (6)»* ¿* Xatl* Cancar In et» 7, 47, 1946»

» 16 *

Aparta da la s re s u lta d a s da a s ta ¡ a b a r a ta r le tre b a ja g do eon l a fo e fa ta s a I s a s , a s s e tr e s an la a a a s iln p re se n te , trab ajan d o eon fo s fa ta s a ra n a l sobra un s u b s tra to da s i ld d ro fo sfa to só d ico , ensayamos a s ta e f e c to , encentrando una * a c tiv a c ió n por a l magnesia qua puado an u larse a In clu sa

*

quedar tran sfo rn ad a an in h ib ic ió n a l aumentar la e e n eeatq t eión da late* Además de e s ta a e e iln d e l m agnesió, henea eg tediado la in flu e n c ia sobra la fo e fa ta sa re n a l da lo s lenes m etálico s Zn, V i, Ge, A l, Xa, F e , y f e X/2 0 0 a p¡2 n eu tra y además m agnesia, cine y níquel a pK ácido y Óptimo a lc a ll* n a, poniéndose da m an ifiesta una d esa ctiv a ció n mareada eqg. alonada por la p resen cia de lo s iones Za, I | y Al) e l ras» t e da la s m etalas apenas e je rc e v a ria c ió n n o tab le 9 la das» a c tiv ac ió n anotada ocurre en toda la e sc a la de pS# Simen, F e tts y d erard estu d ian e l afea t e d e l cadmía * ( l ) sobre la fo s fa ta s e , que es in h ib id a a concentraciones 4* C£ d« 10“ 3 X» XI m arcurio, segón X an talan ti y X icola ( 2 ) Inhiba enérgicamente la fo s fa ta s a a lc a lin a del citoplasm a y d al * ndeleo# Fecha (z) resume ex p e rien cias p ro p ias y da o tro s la»

(1)»* Arch* Bioehea» 12, 385, 1947»

(2 ).-

X x p o rien tla, 4, 314, 1948»

(3}«* Kelr* Chin* Ac« 29, 1255, 1946*

• 11 *

v e stlg a d o re s, an la» qua sa ensaya la aeeiÓn da sala» meti, l i a a a an presencia da a la n in a aan o a la incubación» l a f s g fa ta c a a lc a lin a in activ ad a a s re a c tiv a d a p a r incubación

*

can alan in a 0,01 V durante c u a tra h o ras a 37* a p l 3 ,8 y • con v ari os ca tio n es b iv a le n te s Ga 1,1» 10"* Xf l e 1,1* 1RP»

B te» m * l» n » »

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•

a —

l l ( t l Tb I j t a a t dre fo ü Ís»y$if«» 5» 36?» 1946*

* 23 -

de loe ensayes »• u t i l i s a solueidn tampán As asetato*vero« n a l# preparada «asolando 3 es# As so In cid a As Yero nal sddJL so# 2 se# As clo ru ro sd d lss al 8*#É y 20 os# As nsa mésela

As ácido c lo rh íd ric o 0#1 V y agua d e s tila d a v a ria b le se|á n e l pH de que se t r a t e ) la s o ln e lfa As r e re n a l se prepara • son 9*714 grs# Ae a e e ta to sádico* 14*T14 grs# As r e renal « sd d ise y agí» d e s tila d a lib re As OOg h a sta 000 centímetros

eAbleos# C)# XHSAYOS BE HIDROLISIS* a)# Modelos empleados# B ensoil*carbinol* u) -anineacetofenona* ¿oído p-arainobenr.oiee* ácido o»amÍnsbenseiee*aAl do n ico tfn lce# nieotamida# vitam ina Bg# b)» lenes m etálicos ensayados# Cinc# níquel# magnesio# sálelo # sodio y alum inio en eolaslA n V/Z0m e)» Tácnioa operatoria# Be emplea seas su b s tra to una • d iso lo o ián X/20 de g lio e ro fo sfa to sAdiee temporada son ase» tato * v ero n alf sobre e s te s u b stra to basemos a c tu a r le s sede* lo s a n te rio re s a la ves que consideramos la in flu e n c ia as» t á l i e a sobre ello s#

D)# MEDIDA DE XA ACTIVIDAD VOSFATASICA BE IOS MODELOS. Xn e l e stu d io e u a n tita tiv e de la a c tiv id a d fo s fa tá s i»

24 »

ca da la s modelos* u tilizam o s para la determ inación da l a san tidad ds fó sfo ro inorgánica lib e ra d o l a té c n ic a color!» m étrica da Brigg ( l ) fundada en la reducción d e l f o if m g lib d a ts amónico a azul de mollbdeno por la acción de l a

-

mezcla h id ro q u in en a* su lfito sódica* 3ha vas tra n sc u rrid o #1 tiempo durante e l cual ba ae» tuado a l modele sobra e l su b stra to y suspendida la a c o lín por un descenso rápido de tem peratura* la s operaciones que siguen a la h i d r ó l i s is van encaminadas fundamentalmente

a

ob ten er una d iso lu ció n ds fo s fa te ds concentración adecúa* da para la mayor e x a c titu d d el procedim iento u tiliz a d o

en

l a valoración# l a lín e a ex tin ció n -co n cen tració n (g rá fic o l ) obtenida oon soluciones "standard* de fo sfato * valoradas gravim ótri. sámente en forma ds p iro fo s fa to amóníco-magnóslss* óni1 la id a orta-w rinebeneoioa eetm ndo eefere l a • d ie o la e lln tempanada da g lie e re fn e fa ta s íd ie e jr an praaqg a la da t « M a ln a , n íq o al

y e o b slte fa rn a a p re e lp lta d e e •

re ep eativ an ea te M e n e e -e n e rille n ta , itg e r a m a te ra rin a a 7 11 g e m e n te rasad a qoa hay qae «aparar p a r f l l t r a a t f a pa» ra p reeag u ir la ralaraorldn d a l f le f a x a , X* p r s a lp ita a iln aa e n a a t lt a t i r a een r e la a lln a l aonpenente n a l i l t a a 7 la * g re e ip ita d a s se e a ra a te rln a n « n a la a a a la a eorreependlaB. te a del le íd a orto-R oinehens oíao« I I grapa

d a l le íd a

ra pnrtlelpe as le roñase! Ir. del póngasete n e tllle e pa — qne la a praalpltadea aan fie ila m ta dlasotahlee*

7

ilid o de co lo r blaneo^anari lie n to * inoolnble en agna

f r í a y o e b u llie iá n t «cingle en ácid o s di luidos in clu so en c e á tic o ^ y fácilm ente di&sotafele* a. !

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ex p e rin en tal t%X»C£H4 rCOO}2Za

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19*46

Jflo Sdlido con lig e ro c o lo r Tordoso, in eo ln b le en aguas d if ie iln e n te soluble en ácido á e á tio o d ilu id o ? fácilm ente d íasetab le* . h n. a 1, L j l JL i . Xf Xf

•x p e rlM n ta l

............... ..

(%K.C4B4.C00)2iri

ítf

... ................. •x p a rla e n ta l

Xlf (%I,C«H4-000)2Si

m 34 •

P recip itad o a n C S alido con lig e ro c c le r rosado* in so lu b le en agua* d lfie iX mente so lu b le en le íd o a e ltic o d tlu fd e y fle llm e n te diese* tab le* Aa l l í s 1 e H % ....... experim ental 1 (^B .C ^S4«C00)8Ge Ce % ............. experim ental Ce % ii (%S»C6&4.C0O)2Co

4*)« l n la v a le r a e iln sen m olibdato-M droqulnona-sulf l t e de le a r o lln debida a le e modeles le íd o n le o tfn le e t^ L eetamlda y Titamlna B^ aparees mi p re el p itad o re lia d no se am arillen to en e l proel so momento de la a d ie iI b d el nelib» date* Bate p re cip itad o se formal a)* Cuando se meselan en f r í e t d ie e lu c iln de fo s fa te pfc tís ic o * d ie o lu c iln de le íd o n ieo tfn leo * l a amida e ritam i* na B? y d iso lu ció n de m olibdate amónico# b)« Cuando e l su b stra to de g llc e r o f o s f a ts se «m ilenta previamente a 80® durante cuatro Poras son dichos t r e s me*

• 30 ♦

¿ • lo s y luego «o aftado o le d lso ln e ld n o l m ollbdate améni* 00* /

e)# Guando mesclande previamente fo s fa to p o tásico y L molibdato amdnieo» a ln eno en tro o lio s o ta rr a re a o o iln al* gana# so aliado posteriorm ente la dlsolm oián dol modelo •» • cayado*

/

/

d}# Con s c lu e lln do áoldo m clfbdlec* fo s fa te p o tásico y deido n io o tfn le o , nicotem ida o vitam ina Bg# Xn cambie no ee f ormt dlobo p re c ip ita d o teman#* patos a is la d o s do lao so lesio n es fosfate~no0ole*m olib^ato amdni* o o | a s í tono taapoco a l n o sc lsr solneienos do áoldo mplfb» d ie o f áeldo fo s fá rie o y so lu cián do modelo# So todo o lio parteo deducirse l a aeeldn conjunta dol modelo y e l fo sfa to » añadido o producido on la b l d r á l l s t s dol g lic e ro fo sfa to * con e l m olibdato amdnleo on la forma* olán dol precipitado*

V a lo ra d 6n « w n tltm tlT » dpi ffo fo ro w»r ■! proelBfadc b w da Como e l fo sfo ro forma p arto dol p re c ip ita d o produeidá pretendemos v a lo ra r o l fo sfo ro lib e ra d o son la b id r d l is ls por d iso ln e iá n dol p re cip itad o on VaCV 0»1 Sf tome s i so * tr a ta s e do fosfom ollM ato amenice* y laogo o l exceso do á l c a li v a lo ra rlo son GIS 0,01 B* Basemos v a ria s pruebas pon

- 36 -

lo s p re cip itad o s formados valorándoles simplemente p re v ia ec n trlfü g aeid n y tambián por c e n trifu g a s ! ¿n y a n te r io r la^ vado con agua y alcohol* l a d isp o sic lá n de lo s ensayos es*

4 o«o* agua 1 ce* agtta»! ce# fo s fa te (091 ngr# P/ee*)

já L -jff: - ..m r

4 c#e* agua 1 ce* &gua-l ce» fo s fa te (0*1 mgr* */ee*)

XV

4 0 *0 * agua 1 ce*,agua- 1 ee* fo s fa to (0*1 mgr* P/cc*í 0*2 m o l ácido n ie o tfn ic o

IV '

II

##

4 e*o# agua 1 oc« agua-1 eo* fo s fa te (0*1 mgr* P/ee*) 0*2 mmol

niectam ída

A todos esto s conjuntos añadimos on centím etro edbleo de so ln eián a l 5% de molibdato am&niee en ácido s u lfd rie e 5 V* A lo s conjuntos X y I I no le s ocurre nada y en e l r e s te se forman abundantes p re c ip ita d o sf XXX# y IV ' lavamos con *gna§ XXX" y XV## lavanco con alcohol y lo s XXf y XV le s e e n tf^ fugamos solamente* Al la v a r e l p re c ip ita d o con alcohol se d isu elv e en gran p arto e l correspondiente a l ácido n l c e t l n ico f e l p re cip itad o formado en p resen cia de l a amida

no

se d isuelve tan fácilm ente* Xste hecho induce a pensar l a

* 37 •

¿••ig u ald ad de ambos pro ol p itad o s y por ta n to la partiolpg, eió n on o lio s dol áoldo o do la amida rospoottram onto* lo s ro su ltad o e do la r a lo r a o lf e son lo s sig u io n to si

o,H

C1H 0,01V

(fC » * 8 2 )

(f«l,O d»)

»aOH

I I I .........................

4

1 ,1

Sin lav ar IV ......................... til» .

3

3 ,8

11,4 12,7

lavado con agtta IV»

......... III"

8

... 1

4,8 8

lavado con aleohol IV ". . . .

2

9 ,4

CllodS dol fg aforo pon tañido an a l pro al p ita* » d l a a a l f an «oaa 0,1» ( f 0 .8 2 2 ) cono ,1 — t r a t a — da fo a fo a o liM a to . Kwfalvt» 4 oo* 1 ,8

.

0 | ^ 2 * 3|1$3

co« VaOV O fll

1,069 - Ot 190 c e . C1H o,lV

5,29 -

0,19

5,10 #

0,1548

* 5,10

c e . VaOH O,IV gastados

(Mgrs, do P . eorrospondiontos * * 0,41 « s r s , do F« t 1 oo* do V aO l 0 , 3 ) .

• 58

Coto on t o t a l pusimos an al ensaya I I I 0,1 mgrs* da • f¿ a to ro y sa di a l oaso da que al re so lta d o as asma al

••

e x i s t i e r a cu atro reoes más# s i p re c ip ita d o t o ta l a s daba * s e r da la c o n stitu c ió n da un fo s fs n s lib d a ta f pudlara entrar an su formación a l ácido n ia o tfa la a que o en sumiera an sa • d iso lu ció n más á l c a l i dal debida son a l aunante eonslguiajt t a an a l im aginario paro an ta j a da fósforo*

¿Xa*

5

. 0,822 - 2,400 a s , VaOH 0,11

11,4 • 1,009 * 1,21 2 ,4 0 - 1,21

a a , C1I 0,11

» 1,26 ca*

VaOH gastadas

1,26* 0,1548* 0,108 mgrs» da K

S eta cantidad as tambián algo su p e rio r paro más aproxima» da a la cantidad da V* puesta (0,1 m grs*)f l a nioatam ida aunque formara p a rta del p re e ip ita d a no aonsum irfa á la a ll*

3*8 12*7

• 0*822 • 2*98 09*

0*13

• 1*089 • 1*38 oo* e i i 0*11

2,98 -

1*38

" 188 eo. l»fK 0,11 g**t*d«*

1*60 * 0*1348 - 0*21 m gn, i* 2» ▼a»ss que aun daspuás de la ra á o son agua a l p re c ip ita d a aontaniando ácido n ic o tfn ie o sigua dando un r u l a r da fó s­ fo ro dobla d al puesto an a l ensaya co rresp o n d ían te, aun -

* 59 *

que descendido notablem ente d f orando no ee lord»

2

# 0,622

* | t l44 00# EsOE 0,19

4,6

, 1,069

» 0,46

c e , OlE 0,19

1,64

• 0,46

* 1,16

oo» EaOE 0,1 9 gestados

1,16

, 0,1646 m 0,16

«gr«« do ? ,

9» aprcodradaaente Igual que o l v a le r obtenido erando o l o ío to ra on presencia de n le o ta a ld a no ee lo rd con ogra jr algo su p e rio r aún a l v a lo r do fd sfo ro puesto on la d lso lji e iá n .

■

III

1

,

0,622

•

0,822 e o , EaOH 0,19

8

•

1,069

*

0,86

0,85

m 0,66

co , CIE 0,19

m 0

Toaos que a l la v a r e l p re c ip ita d o , obtenido on p re se n cia de ácido n ie o tfn ic o , eos alcohol se ha d is u e lte on 41 t6* de lo que h ab ría p o rte ri órnente do d iso lv e rse on so sa,

IT ##

2

*

0,622

*

1,644 00, l a « 0,19

9 ,4

* 1,069

*

1,00 00, CIE 0,19

1,64

•» 1,00

*

0,64 eo, 9aOE gastados

0,64

• 0,1646 *

0,08 ag ro , do 9,

• 40 *

T a la r también aproximada* an promanóla da n ieataa id a * an»» qno an o ata aaaa p ar d sfaata* a Xa san tid ad da * paaata a» l a d ia ü n iié a »

In flo a n a ia an la a capéala!én dal p ra a ip lta d o do l a i m t l » dad da m a lltd a ts aliad ida* *

Al

c o n ju n ta s

4

aa# agua d a a tlia d a

0*2 maol ¿ s id a n ia a tfn la a 1

c .o . HgO«*l c*a* s o l, fo a fa ta (0*1 mgr*P)

ra p a tid o doa vasas añadí moa 1 ( 2

a»a* ra s p a a ti vanenta da

aolnaldn da m slibdato amdnioo a l 5Í# £n ambas aaaaa aa& * trlfagam as a l p ra a ip lta d o formada* dlaolTomoo an aaaa*

y

valoramos a l oxea «o da á l e a l í aa» ría iÉ a alarfefd riaa 0*011* l a s re su lta d o s han sidas

. , daga «atad?,»,______ X olihdata améniao

VaOH 0#1 I

ClH 0*011

1

o*a

M

2

c*e

0*0

* 41 -

3

*O9822

* 2*466 es* la ffl

3

* 0*822

* 2*468 ea*feOX

5*8

• 2*068

- 0*620 ce» ClH

5*6

» 1*068

* 0*508 oe.C H

2*466

*9*620

• 1*846 e e . 5*01

2*466 - 0*688

1*84

• 0*1348 ** 52¡í^L2S*kíiL

1*86

* 1*868 e**fe€i

# 0*1348 * 0*280 ngas»?#

Como puede observarte* no hay in flu e n c ia alguna motivada • p e r l a santidad ds ao lib ú ato añadida»

In flu e n c ia asb rs la eom potielln dsl p re s t pitada ds l a sais» f a e e iln a 805 durante en a tre horas d a l sistem a4

c*ü*

da g lio a ro fo s fa ts sld ic o X/20

0*2 an al da 6» n ie o tfn ie e a la aaiida 1 o»e» agaa 1 e»a» solución da f o s f a ta

(o,l agrs*de

2 }»

Xn f r í e a l modela na tie n e a c o lín sobre a l smbstrsft"»# j a l v a la r obtenido por a l a n te r io r a lta d a volum étrica pa» ra a s ta sistem a an frío * s a r i dnicasante debida a l fo s f a ta s i b ien an ambos v alares do fls fo ra * t a i r is o añadido y ex» parim ental d al p ra aip ltad o e a lsn la d s an forma da ¿safaos, • llb d a ta a a ln lso no coinciden b ien por no corresponder d isto p re cip itad o exactamente a la fírm a la 884 ( 6 ^ 4 )3 * 12 XsOg» b ien por in te rv e n ir an su cem posiailn san tid ad es v aria b le s da modalo» 21 a l c a le n ta r a l conjunto a n te r io r lm bissa a X

• 42 -

g m vmriaal&i en 1» eem posta!In t a l pra a i p í t a t e te a á rfa « que r a r if ic a r s e * (Valor en saltante)

8 0 tf 4h.

* (A aeifa 6*1 nodal* sobre el «

su b stra to i* V alar en f r í a é a l sistem a !§}« tan laid o n ie o tín ic a «MnMwwMMujfiajflEai

b « I 0,1*

OIS 0,01*

▼•lar an f r í a d al o letean

3

3^

▼alar an c a lle n ta • * • • • • • • • .* • •

4

0,3

Aaalén Independíanta » • • • • • • • • •

3

0 ,7

B iialtotaü ■ e ra , do * T alar en f r í a

•••••* •••* * •••

0,866

▼•lar an c a lle n ta ,., • » . • • * • «

0,440

Aeei6n d al aed ala

0,343

Be deuda aa doduoo qua a l m i a r an a ñ ila s te rla n o • a a r • aproxlandexente lg o a l e l m i a r a s f r í a o la a l v a lo r do l o •ao i 6n que • 80» durante e n a tra b o n o a ja ra a independio*» ten an te a l deido n ie o tí n i ce totora a l g lia a ra fo o fo to o ld iaa*

2«), Can la nalda n le a tín le a

- 43 • 0*0*

Valor on f r í o dol olotona

gOOtadOO

laOS 0*12

C1H 0|O 1I

3

8*8

Valor on e a lio n to

M

Aeeidn dol nodolo

%0

■oro» do 2r V alor on f r í o

0*193

V alor on e a lio n to M 0*280 Aoeién dol nodolo «+ 0*119 También on o oto eaoo ee r o r l f l e a eos b a sta n te aprexlnaeldn l a Igualdadt V alor on e a lio n to • Valor on f r í o ♦ ¿eeidn — dol nodolo» Be o lio poden*o e o n e ls ir qno o l p re e ip ita d e • • prodseldo a l in ro o tig a r l a aeeidn do loo nodales deido s i* o o tín le o y nicotam ida sobre o l g lie e ro fo s fa to o¿diee oo o l alome que o l obtenido en f r í o on loo enoayeo a n te rio re s* Contenido on nitrógeno dol prooipitodo*» lieemeo a n á li s is do 2 amoniacal dol p re e ip ita d e am arillo obtenido en lao OS p erien eiao an te rio re s*

% 2 anénifteal d ol p re e ip ita d e ***** %2

0*42

• 44 *

l a inconstancia da la composición 4c e s ta p re c ip ita d * dedg s id a ds lá e re su lta d a s a n a lf tie c s a s p e r a lta a s ig n a rte una e s tru c tu ra definida* pareciendo posiblem ente a a case de «h* a r r a s t r e d el modele por e l taaaile de l a n e lle u le f o s f a ta * lfb d iea* 2o puede T alara res* p er ta n ta * su son tenido en • • fó sfo ro por e l alta d o T o lu a ftrie o encapado y para e b ria * l a d if ic u lta d que crea su ap a rició n so fea procurado que % do e l p re cip itad o se re d isu e Ira * ■odiante ensayos p r e ll n l n ato s de su so lu b ilid ad * on la so lu ció n s u lfd ric e dol re a g tir e * dando pro t í amonte a l líq u id o que contiene o l fó sfo ro una d ilu c ió n adecuada do modo que todo Ó1 pueda f e r a e r *A» pi demente e l a su l do molibdene para su r a le ra ció n c o lo rid # tric a * fiara r s r la p o sib le In te r fe re n c ia on la r a le ració n w$. tir a d a por la a p a rició n de e s te p re e ip ita d e so basen d e te £ minaoiones colerim Ó trloas con so lu cio n es standar# de f o s f g t e segdn l a sig u ie n te disposición* 4 o*o* de agua d e s tila d a 0*2 umel de ácido n i c a tín ! ee 1 c*e*

c*o* sel* f o s f a te (0*1 mgr*f)

1 c*e* do c e ta d iso lu ció n contiene 0*0160 mgrs* de fó sfo ro y on l a ra le ra c ió n e o lo rim ltric a os obtienen 0*0160 mgrs* f/oc* Luego e s ta ra le ra c ió n c o le r in ó tr ic a os p rá e ti* camente c o rre c ta on p resencia de le s modeles* aun erando *

< 45*

so llegue a formar e l p re c ip ita d o poro con t a l que ee ro # l ouolra on seguida y pueda tomar p a rto en l a reacció n celo* renda* 5t)+ f c o l eaoo do aeoién combinada dol ácido n i c o tí» n ic a y l a ritam in a Bg con o l iá n bg ee reproducen en la t g b la l unos T aleros obtenidos re p e tid a s roeos segdn ol dio» p o sitiv o p rin cip al* 4 ce* glioorofosfate»tam pán 1/28 0,2 an al do nadóle 1 e*c* % • - 1 ce* s e l bg pare a l lado de e s to s v a le re s elevados se ban obtenida en e s ta s condiciones algunas veces re su lta d o s n eg ativ as de 1& d r ¿ l i s i e obteniándose lo s prim eros cuando e l eorrespondiqg t e te s tig o s in modele n i m etal dá un contenido i n i c i a l

en

f o s f a te liberado* Beoda lu eg o , l a s ex p e rien cias ban sido * re a lic a d a s simultáneamente con e l ácido n ic o tín io e , l a ni* eetamida y la vitam ina B y con e l mismo su b stra to y la — misma solución de s a l de magnesio, en id é n tic a s eondieig • nos experim entales y empleando on su v alo ració n l a mioma * dilución* T r a n s p a r e n c i a s D ilución 1 i IB

Acide

Amida

31

82

Vlt» Bg 27

• 44 m

naranarou mí

globpukab sobrs kcpblos pe

> n s » tm

A}* Obtonol6n de globulinas» le e globulina* se obtienen a p a r t i r áe enere t e tan»* gre de vara* S i enere ee previamente cen trifugado y luego ee t r a t a con un velamen ig u a l de ana solución satu rad a de s u lfa to amónico dejándolo e s t a r en repeso a b a ja tem peratg ra durante dees boras» H só lid o p re c ip ita d o ee f i l t r a a l a trompa y lava con solución de s u lfa to amónico a media • saturación* l a t o r t a de p ro te ín a s a s í obtenida se d isu elv e en l a menor cantidad p o sib le de d iso lu c ió n sem isaturada de s u lfg t e amónico y se p u r if ie s finalm ente p er d iá li s is * »}* Acción independiente de g lo b u lin a s j combinadas cea ug

a ) , D isposición de la s cxperleneies* 8e e s p ira s u b s tra to de g lic e r e f e s f a te b/feo*tampÓn, de a e e ta te » v e ro m l sobre e l que se base a c tu a r la p r e ta l se »» b ien so la o unida a l metal co rresp o n d ien tet

• 4* *

X Substraía

4 ee»

XX

1 ni

IT

T

TX 4 ee»

4 ee»

4 ee»

4 ee*

4 ee*

Zfl

11

H

Se

1 ee*

X ee*

X ee*

X ee»

1 ee» 1 eo»eol«

*/£o

1 te» A j 1 ta llo *

1 ee»

disponiéndose adfirfs la correspondiente s e r le i a i r a t l g e s a I r su b stra to y s in g lo b u lin a y g letalin a* m etal* b}* l a s condiciones experim entales

iob

siempre o*c

ee

empleen g lo b u lin as 40* durante en periodo de eebe k i n t » e)* ffc n ic a o p erato ria* fiara e v ita r l a p r e c i p i t a d l a de le e p ro tein ac afladidae con le s re a c tiv o s de v a lo r a d I r del fo sfo re* ee eeparan -» previamente eon s o ln e iln a l 20Jf de le id e tr ic lo r e a c ltie e * ee f i l t r a y se lle v a l a d is e lu e ila a la d llm elln c o n v e n id te* *n lo s cases d e l b e n s e tl^ e a rb is e l y l a #*amino*eetefji nona sen v á lid a s l a s observaciones bochas anteriorm ente e s te respecte*

a

-

TABLA

Za

v

Olobtalinao

0,84

o,n

0 ,»

4»

-

III

%

Oh

Al

0,T*

o9n

0*§4

0 ) , ACCIOM COWOTTA OB 8LOBPLIKAS T B6PBIB8 BB T08TATABA a ) . D lsp esleléa de la s enea?**. S« emplea eu'hetrate Ae g lle e ro fo e fe te a ld is a

ta s

posada en la mi ama d ie e la c lln eos aestm te-T erosal y s a lv e e s te eonjunto s u lstrm te -ta a p lu ae laven a s te a r eeaj«ataa*ft te lea d iv erso s modales ensayadas son glo lrelin ea oon a r r e ­ glo a l sig u ien te esquema!

n i

1

XI

Substrato**

4 e#e*

4 o«o*

4 e.e»

0*2 m o l de nodelo

b en zo ilcarb in o l

e*aminebenzoleo

P-amlnale n e o le e

Agua n t i M

1 O«0«

1 c*c»

1 e .e .

1 e .e .

Globulina*»

1 0*0*

1 0*0»

1 e»e*

1 «*#•

t? 4 o*M iaea^g tefansm a

• 4t *

?

TI

4 e.e*

4 o*o»

4 o*t*

to ld o ut* ootfnioo

aoida a i* o o tfn io a

T ita a in a lg

Agua •••*«#

1 e*o#

1 e*o*

1 e#o#

Slebtxlinas*

1 0*0*

1 6*0*

1 0*0*

S ubstrato *

0*2 UB*1 do «edolo

T O

b)* X*o condioienec oxporlftontaloo jr la tie n te n ep eratt, r í a exactamente ig u al

qhc

en a l caco a n te rio r*

?- a

i

> < L -a

0*S4*

G lobulinas Id* oca b o n so il» earM nel

e*as*

Id* con p»antnebefisoleo •**» 0*W* ••* 0 ,B«í Id* oca o*ami nebenso loo ***» 0*44* *** o»out 14* ten wamineace te f e nona * 0,36* *•• M O Id* con deido n io o tfn ic o *** 0*60* *** Id* con nlootauldo •**... *.»*• 0*SS* •*• Id* con ▼itamina

*••** bldrollM á*.

8,04

0,0800

6,10 %

0,04

0,1016

0,84 *

6,76

0,8780

80,8 *

8,12

1,9000

89,87 *

8,48

1,4600

98,84 *

8,88

1,8000

90,77 •

9,18

1,8000

90,72 •

9,88

1,4780

98,10 *

9 ,9 1

1,4800

99,84 *

10,40

1,8000

88,87 *

10,70

9,9800

( i ) * - A,P*Marensíi *?o to o e trfa ,jr «n a p lia a a id n a l a n d lis ia Bloldgieo**t pdg a* 4 M I #

- 78 •

Betos re su lta d o s se expresan gráficam ente en la g rá fic a 2* Da e llo — deduce que an la a condiciones experimenta** le s a n terio rn an te fija d a * da tiem po, tem peratura y caneen— tra e l6 n f a l pH á p tia o para la acald a da l a fo a fa ta a a ranal» e s tá comprendido an la sana 0,85 - 9,15* o .- In flu e n cia de U eone«ntr»al¿n *«1 « u b .tra tn . l a t e ensayo ae r e a l iz a a pH constante 6*74/40* salen— tando an term ostato a 37*580 durante una bora 5 cc* da so lj| eián da g lie e ro fo s fa to sddieo a d i s t i n t a s eoneantraciones» 5 cc* dal tampdn correspondiente da a e e ta to -re ro n a l y 0»01 grs* da fo s fa ta s e suspendida an 2 ,5 cc* da agua d e s tila d a con a rre g la a l sig u ie n te d is p o s itiv o !

1?

?

n /io

H/20

H/lOO

5 cc*

5 cc*

5 ee*

5 CC*

0»01

0,01

0,01

0,01

0,01

2,5

2 ,5

2 ,5

2,5

2 ,5

I

XX

5 cc* su b strato

tf

H/2

Tampán pH 8» 76

3 CC*

F o sfatase grs* Agua cc* ••* ••

XXX

Con los correspondientes te s tig o s s in ansias»

• 79 •

1

11

n i

IT

5 ce* su b stra to

X

x /2

xrtto

n/zo

Tamp6n pH 6*76

5 ee*

i ee*

5 ee*

5 ee*

8 ee*

Agua ee* *****

2*5

2*8

2,5

2*8

2*5

?

VlOO

y te s tig o s s in su b strato » 6 e»e* HgO 5 e*e« tampán pK 5*78 0*01 gre* de fo s fa ta s e 2*5 e*e* agua X»a ra io ra e lá n del f¿ a fo ro lib erad o en eada uno de le e enea* yoe ee r e a liz a eegdn la Bañera d e e e rita en e l apartado a n t¿ r l o r y con la d ilu e iá n eorreepondiente a l pH análogo 6*76* Bl re su lta d o ee e l s ig u ie n te ! Caneen» tra o lte

agre* de T pro* eentee en 1 ee*

Xgre* de í h ld r£ 11sedee

Toreen ta je

X

31*5

3*55

11*4

x /s

15*75

4*05

28*7

X/10

5*15

1*20

34*9

X/20

1*57

1*09

70*0

X/lOO

0*315

0*28

79*3

Be e s ta s e rle de re su lta d o s ee concluye que la h id r ó l is is «►

* doe (XX* XX' y IX '’*)* y t r e s horas (XXXf XIX' y XXX")* respectivam ente» a l cabo de la s eualee eeea * la acción de la ensima» le v alo ració n a r ro ja loe re su lta d o s s ig u ie n te s *

Tiempo

mgrs* de P h id ro lisa d e

P ercentaje

1 hora

0*950

61*2

2 horas

1*250

80*6

S horas

1*550

97*9

en donde se observa un asoenso e n e l p o rcen taje do P lih e ra do con e l aumento del tiempo de contacto* pero ya con una » hora de acción se ha h ld ro llsa d o ada del SO % d el i e t e r ma» picado como su b strato »

o.» In flu e n cia de loo iones m etílic o s sobre 1» a c tiv id a d de X&. fagffttagp. itnaJU

m 33 •

Se determina en e s te ensayo l a v a ria c ió n que experlmen t a 1* a c tiv id a d de l a fo s fa ta s e debido a la in flu e n c ia de * loe Iones m etálico s magnesio* eine* ñique1* calcio* alu n ¿ * nio* sodio* h ie rro y manganeso* todos e llo s a concentración b /2 0 f sobre un s u b s tra to de g lie e ro fo s fa te M/20 tamponade • con so lución de aoetato*veronal a 37*36* durante una hora*

XI

I 5 e.c* de s u b stra to

5 o.c# de s u b stra to

S e .c . tampón 6*8

6 c.e* tampón 6*8

0*01 grs* fo s fa ta s e

0*01 grs* de fo s fa ta s e

2*6 c .e . de agua

1*8 c*c# de agua 1 e.c# solución ^ t ó l i e t

▼arlando en XX la n a tu ra le sa del metal u tiliz a d o ! cu le s q& sos de magnesio* cin e y níquel se ensaya asimismo la ▼aria* eión de la In flu e n c ia con e l p£ 5*3| 6*6 y 0*16* Ssspuós de l a ca le facc ió n se e n f ría con h ie le y del t a l de 12*5 e.c* se toma 1 c.c* a l que ee añaden 6*6 o*c*de agua y 0*5 c*c* de óeido t r le lo r o a e ltie o f se f i l t r a y del * f i l t r a d o se toman 1 6 2 c .e .* segdn e l fó sfo ro liberado* se diluyen con 7 c . e . y aiaden lo s t r e s centím etros cóbleos qft ▼respondientes de la eo lo rlm etrfa d e l P* In e s ta s condiciones experim entales le s re su lta d o s son lo s s ig u ie n te s t

84

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B» donde e» deduce que ¿ d r a g a n te e l Idn Magnesio acida so* tiran d o X» M ^ r d lls i» cnsiM ática 4» 1» fo s fa ta s e renal» *1 a ín a a s í oca» «1 n ío u el presentan fu e rte in a c tiv a s!d n a t i * des los* pH ensayados» f *• in flu e n c ia 4» la o o n ecn traelfa d al «agnosia en w poder

Mll2SEl£.e Se disponen une s e r ie de ensayes de a c t i v a d fa de fe»* fa ts e a reral p er idn magnesio variando dnieemente i b »1 d lf p o sitiv o la eoneentraeidn do la ta * l a in flu e n c ie da la eos* c e n tr a d á n sa observa a la s pH 5t 3 | 7f 8 y 9»16»

* 86 •

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Bst* d is p o s itiv o de h i d r á l i s i a ee c a lle n ta durante una here a 57-M* y se opera despule de la e a le f a e e ila exactamente « ig u a l atrato>t*npfn pH 7

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todo a l a n te r io r d topo oí t i r o do h id r d lis le oo e a lie n ta a 80* dur&nte euatro iiorao a l cabo de ia e c á e le s oe opera eone

on

o l ensayo a n te rio r* Hb e l eneayo e ie te ín a M /lO-níquel eo observa la fo n o » » ci6n de una in ten sa so le ra e ld n re je * rln se e * lo e p o rc en tajes de fo sfo ro lib e ra d o on oada ime de lo e ensayen ee exponen a co n tin u as!fo t

* 108 .

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Bn e llo s puede observare» que e l *1 en p resen cia de lea anjqg. ¿cid es glfcoeola» U s in a y e l s te Inc. elev a e l p o rcen taje del ? M d rp llsad o son r e la o if a a le a e o lfa Independiente d e l — an ln o leld ef e l re s to de lo e p a ta le e ensayados di sainaron la a e e ién gas posee e l tralnodcldo llegando la c la s e a anularla en alganos casos» 111*. Aeol6n de aminoácidos sobre pódeles de fo s fá te s e Se ensayaran «da s e r ie de ex p e rien cias l a in fls e n s ia ** que lo s aminoácidos alanina* g lleo eela» lis in a * e is te ia e ¿cid

y

a s p á rtie o ejareen a concentraciones 8 /s y d/lO sobre

lo s nodales ácido «anisóbenseles* ácido p»aalnobenaeieot • • utf .am inoaeetofenona* ácido n ic e tin io o y b e n so il.o a tb in o l* Se c a lie n ta durante cu atro boros a 800 e l s ig u ie n te *d isp o s itiv o de M d rá lie le *

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• 113 *

Su la ta b la a n te r io r 4* la s p o rcen tajes da p b id rs lis a * des p ar la s modeles en su acción conjunta m n la a amiiioáol— daa sobra a l su b stra to da g lie e r o f e r f a ts a ld is a y a s l a s s a i d ia lo s a s experim entales fija d a s * paada obserrm rset !•)* Xas aminoácidos sos an todos l a s easos sansa ds l a día* a l ¡melón da la a e tirid a d d al ácido p»amlnsbeiisáieof a l dis^L s a i r l a eoneentraeíán d a l aminoácido a s mayar a l deseante

*

qsa experimenta l a a e tir id a d d a l aodala» 2 t ) # Xa a e tirid a d que pasas a l ú d a l a e*aminebensáies sa n

«

asimismo dism inuida p ar la p resan aia da todas la s aminoáei— dos ansaysdas y a l a s dos ecmeont ra sio n e s da ástes* Igual «*• que an a l easo a n te r io r l a a e tir id a d aumenta a s relam ida aas l a presentada p er a l aminoácido astaasdo 1ndepend1entemante sobra a l su bstrato* l a s ra ria e io n e s son pequefiat y a s e ila s * an amibas se n tid a s asando la s eoneent ra d o n e s da l a s a d n o á c l das pasan da W z a < /l0* 30 )* l a aeeidn independiente da l a smlnoasetofenema s a lta e l g lle e ro fo s fa te a s la s mismas condiciones experim entales sa encuentra an todas la s easos ensayadas dism inuida por la pxs. san é is da la s aminoácidos correspondientes* 4 t ) # Ie s p ercen tajes encontrados an lee te s tig o s que nos — m sestran la ae eián que e je rc e a l ácido n ie o tfn le o eos» moda* l e da fo sfa ta se * sa encuentran dism inuidas aunque no an ma»~ eba proporción p er todas la s aminoácidos ensayados* Xa a i s t q l na y e l ácido a s p á rtie o f que aisladam ente presentan la mayar

• 114 *

a e tir id a d da la s aminoácidos ensayados* san la s que to a s t* smn a su r a s ana dism inución manar an la a e tirid a d d al na* dala aislad a* 5 t ) # 1* d ó b il a e tir id a d que p re sa n te a l b e tise il* e a rh ia e l * independientenante sobre e l su b stra to da g lie e ro f e s fa te e¿ dieo eoma modela da fo s fa ta s e sa anaaantra an g en eral la s q t mentada p ar la s aminodeidoa son la s que sa ba ensayado es* juntamente* Xa aeeidn independiente d a l astineáalde temblón r e s a l ta ligeram ente Incrementada*

!▼*- Acción aanimnta d a l sistem a aminoácido»! in m stálteo se» bra modales da fo sfa ta se * Sobra e a a tro centím etros edbleos da d iso lu ció n s s b s ti* te*tampón pB T estd an 0*2 m ilim oles dal modela earrespa* — d ie n ta conjuntamente een 1 es* da d iso lu ció n */lQ d al amtq* deida y 1 es* da dieelm etóa 1/20 d a l ión m etálico re sp e e ti* ro* Bu a l d is p o s itiro da h id r ó l is is a n te r io r sa s u s titq r s a l aantfm stro cdbico da agaa p ar 1 ce* d a l ilm m etálica — qne se ensaya* l a ca la faaa ió n exactamente ig u a l a 800 durante cu atro horas* a s í como la s operasiones p o s te rio ra s a la h id ró lis is » 8a ensayan la s modales c*aminobansóloof p»smlnohensól. eo* (//•aninoasstofenona* ácido n ic o tín ic o y benmell*carbinóL

» 115 •

le s aminoácidos u tiliz a d o s sont g lleo cela* aianina* 1 i s i na* c is te in a * y ácido a s p lrtle o » lo s as ta lo s su so lu ció n */20 ssu t magnesio* cinc* n íq u el y e l s a l é i s en algunos enees*» Xas re su lta d o s de l a h i d r ó l i s is se esquema tis a n en l a ta b la T H # Be e llo s se deduce* l o ) # Xn e l caso d el modele p»smlnobensóioe hay* en general* dism inución del r a l e r correspondiente a la a e tirid a d d el qg d ele solé* aunque se o le ra e l correspondiente a l medele»aa&> nodoide en ausencia de setales* XI r a le r correspondiente

al

conjunto m odolo»elsteina»£a e s tá en consonancia e sa e l tas» b ián clorado p o rcen taje obtenido en ensayos a n te r io r e s para e l conjunto elateina*£a» 20 )• Xn e l caso d el e*amlnobengálee hay siempre dlsm inucida con re la c ió n a l fó sfo ro lib e ra d o independientem ente per

el

modele y c a ire en e l caso de la g lico co la* que permanece »» prácticam ente constante* hay dism inución también con rola*» cidn al sistem a aminoáeÍdo»medelé* 3«)# lo e r a le r e s eo rresp en d ien tes a l conjunto aminoacetofe» no9a»aminoácÍdo»metal son in f e r io r e s en todo mámente a l n * l o r presentado per e l modelo a isla d o y apenas p resen ta

re»

rla c lá n notable con re la c ió n a l p ercen taje de fó sfo ro hids& U sado por e l sistem a anlnoáeido»medele en ausencia de men­ ta l.

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l « t - Se ha eonprobado l a a e tirid a d de preparador de fesfat& ea re n al sehre su b stra to s de g lie e re fo s fa te sádico* ejt tudlande ene r a rla e ie n e e t en f uncí dn de pH* y cencen** tra e le n e s de aquel y de la anaína* 2 t* - Se todos le e len es n e td lle o e ensayadee e je rc e n r a r i a — eidn n etah le en le a e tirid a d de la fo sfa ta se * nagnesle» cine y níquel# Bl magnesio incrementa e l p ercen taje de ? h id ro liead e en toda l a e e e a la de A

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quel in a e tira n aefn i ene en ig u a l esctenelfa» l a In flu e n cia del magnesio eohre la a e tirid a d de l a — fo c fa ta s e ee e je rc e en d is tin to grade eegdn la eenee»"» t r e e i f a del ldn m etálico* llegando a I n h i b i d l a p a i • e i a l cuando d a ta ee alorada* 40 *» Comparando l a aeeldn de la f o s f a ta r a re n a l sobre gafe*»

t r a t e s de g lic e ro fo s fa to s ld ie o y de an in efo sfo n ate de dlbeneilo* ee encuentra que posee una a e tirid a d nacho señ o r coso amidasa que coso esterase* 5«#- l a a e tirid a d que la fo s fa ta s e e je rc e sehre un enhetra*

* 119 *

t# fo s fa a íd le e ne experimenta v a r i a d l a ap reelab le a l p asar d el pH n eu tra a le id o e a lc a lin o # l a s v a ria e ie * use en f u n d í a de l a c o n c e n tra d la de l a ensima e

el

sube t r a t e siguen la r e l a d l n general* dt** diciendo i n t e r r e n ir le s iones m etílico s* cine* aíquib magnesio y e s te le a pH leíd o * neutro y a lc a lin o sobra un s u b stra to fosfam ídice en presen cia de fo s fa ta s e re* nal* no e x is te v a r i a d l a alguna ap reo iab le en su a e ti* vidad# 7s*» Lo8 aminoácidos al&nina y U s in a no ejercen in f lu e n d a alguna sobre la a c tiv id a d de la fo s fa ta s e re n a l a een* c e n tra d < n W 2 y 3/20* l a e le te ln a a ambas concentra** cien es es causa de i n a c tl v a d ln m anifiesta# 8*«• Bl ciño y e l nfquel* actuando sobre la fo s fa ta s e re n a l en p resen cia de le s aminoácidos glleocelo# a la n in a y * U s in a siguen inactivando l a fo sfa ta se * aunque en me** ñor grado que cuando é sto s e sté n ausentes* l a in flu e n ­ c ia que e je rc e e l magnesio sobre 1* a c tiv id a d de la ** fo s fa ta s e re n al en p re s e n d a de aminoácidos depende de la c o n c e n tra d In de I s t e s f a c o n c e n tra d la 3/2 no hay e n r i a d l n se n sib le ocasionada por la p resen cia de mag­ nesio» 9*»~ lo s aminoácidos* por s í mismos# favorecen la h i d r il l*

- 120 * >

s i s d el g l i cor ©fosfato b ^ í q « | alcanzando sn 11797 pcj» to n ta je t u t i ta to d e l ácido a s p á rtlc t# 1 0 t#- l e s iones no t á lle o s adicionado» a lo s aminoácido» que actúan independientemente to te o e l su b stra to ocasionan dlsm lrraeiáe de en activ id ad # excepto t i *1 j 2a que t a p ro e tn c ia de t i s t e i n a elev a t i p erc e n ta je d t V h id re lj. sedo# l i e * - l e s aminoácidos ocasionan# g e n e ra l» tn te v dlsmlrracidn * d t l p o rcen taje d t fá sfo ro lib e ra d o por lo s modelos d t fo sfatase* 12«*-Por re g la general# l a ad io id s d t m etales a l sistem a *¡g dalo-aminoácido es cansa de d ls n ln n e lln de la cantidad de P h ld ro liead a* le s e le re c ie n e s qne se presen tan

ti»

le s cases d el conjunte m odelc-cietelna^oinc e stá n d t * acuerdo ton la elev aelén propia d el sistem a e lsta in a * * c in e aislado#

* 121 • ■

3 * . DIALISIS »

U FOSFATABA RESAL»

- ****** TEORICA -

A ltera y colaboradores en 1230 ( l ) obtienen por d lá li* s i s prolongada do fo s fa ta s e re n al una fo s fa ta o s in activ a# y atrib u y en e s ta in a c tiv a c ió n a la o s e lsid a d t la tn s ia a t n nn apoensima p ro táieo in a c tiv o y tan grupo p ro s té tic a d i a l l sable* Satos a n te re s d en sestran qne e s te eeensina no pnede / s e r nagnesio sin o qne t e t r e t a de una su sta n c ia orgánica 1 | b i l qne puede s e r obtenida incubando e l boleferm ettte a 1000 durante unos minutos en sed i o neutro# tratam ien to que des** tru y e e l apoenslaa s in que la eeonsima r e s u lte afeetada*Xlg. elando e s te últim o to a un preparado de fo s fa ta s e p&rolalnqg te inaetlvado p er d i l l l s i s e por ineubaeidn en medio leid e# se obtienen soluciones a c tiv a s de fo sfa ta se * A ltera r e a lis a pruebas de e s ta b ilis a e iá n de fo s fa ta s e re n al y afirm a que en dominios fu e rte s de p l (2#9S) la ias& tiv a e iá n es ir r e v e r s ib le y a menor acid es es re v e rs ib le 11¿ vándola a pH 9 durante ig u al tiempo* *e in a c tiv a c ió n pudie­ ra s e r ocasionada por una transform ación en m etapreteina# pero por la curva parece tr a t a r s e de una diseelaelám H olofosfatasa

.......

( l ) . . B# 71# 1913# 1930*

ú o fo sfa tasa ♦ A pofeefatasa

* 122 »

que comprobaría le n a tu ra le sa compuesta de le fo s fá te s e t e ­ na! f la in a c tiv a c ió n y la a c tiv a c ió n esa e l p l sen come l a d iso c ia c ió n y l a aso ciació n del fem an te* excluyendo su cqg se le n te e l c a rá c te r s a lin a de la u n iln que pudiera s e r á s ­ t e r e anida b id ro lisa b le * En 1939# A lte re ( l ) combinando e l liq u id e di a l i sable * son l a so lu elán de p ro te ln a in aetlv ad a por d i á l i s i s de fo s ­ f a ta s e re n a l y adicionando magnesio pretendo beber legrada una re a c tiv a c ió n d e l 100 $* Ten B ular y Bata (2) in a e tiv a n la fo s fa ta s e re n a l por d i á l i s i s a pS 4#S y anotan re a c tiv a c io n e s p a rc ia le s per adj, e iá n te so lu elán de encima a eb u llició n * Xn la e t a l l i e i f c de la so lu elán del ferm ente a d is tin to s pH se destruyo e l apofermente y l a e o fe s fa ta s a permanece» *esolando á s ta con e l apofermente se encuentra que cuando la e b u llic ió n se ba­ se a pH 3 bay impedimento in clu so sobre la so lu elán de fo s ­ f a ta s e mima» d e e te n s (3# 4# 8}* re p itie n d o l a s ex p e rien cias t e Al* te re # lle g a a la conclusión te que la aeelán a c tiv a n te t e -

(1 )* - Beppe-Scyl» 2# 261# 43# 269# 1939* ( 2 ) ,- X xperientia# 3# 412# 1947* (3 )* - Biochen*Z* 308» 37# 1941» ( 4 )*—Biocben* 2# 310# 42# 1941» ( 3 )*- Areb«lnt*Fbarmacedyn» 68» 419# 1942*

* 12* «

«na « o lv eife da anaína aalan tad a a d al líq u id a da d lá lia la no aa debida a la p resencia da «na e a fa a fa ta a a alna náe ptjg, bableraente a l i t n a ln a ó cobalto que e x is te an «ay pequeña cantidad y que forma eongteje d isociable» Bacba opina que l a fo s fa ta o s daba eonaldararaa aono * «na anaína da n a ta l d la a ia b la ( la nayor p a rta nagaeale y a re c e s a ln a ) cnya a a tir ld a d no e s tá unida a la praaanala da «n n a ta l n ía qne an la n td ld a qna Ja to aa «a alan an ta da * e s tru c tu r a d a l ee n p le je orgánico p o rtad o r d a l grupo catira* alando tasfeíln p o slb la qna no a n e la rra acansina dlao aialb o y qna la a a tirld a d a n s ln á tla a a st# unida a la e e e rd ta a e íá a an un compleja « e t í l ic o da d ire m o s ra d ic a la a da l a apeen* alna» fh a a i ( l ) an 194* e«aprueba que la d i á l i s i s prolonga» da a 3T® es c a u sa da I n a c tir a c iln da la fo s fa ta s e ln te s tl* nal* la cual puede re a c tiv a rs e por in cu b aelfa con a n in e le l dos en medio a lc a lin a datam lnando la nsdida da la a e tt r l* dad a n s ln á tla a an p resen cia da c ie r to s lan as inorgánicas y a f im a que e l grupa p rc s tá tic o d ia lls a b le pudiera so r una aanbinaalán da un n a ta l con un eonpueste conteniendo grapa anlna-áclda* Por an p a rta Abnl-Padl y King (2) in te n ta n a c la r a r l a

(1)*» Biocbln* Biepbye# Acta» I* 61* 194?» (2 )i« Bioeban» ^

44§ 45** 1949*

n a tu ra le s» del f a c to r d ia l!s a b le s in le g ra r ningún re su lte » do apreelable* Por vmestra p a rte realisam e* una s e rie de sa^nprfrsmilaa de d i á l i s i s con e l fin * p er un lado de le g r a r se p a ra r e l »» apeensima» con e l que unido a le s modeles de fo s fa ta s e he*co r ensayos de a c tiv id a d en si m ítica» y de o tro conseguir to s acerca de la n a tu ra le s a del p o sib le co fem en te qne nos • d aría n lu s en la e s tru c tu ra e lfo de m e ra s m éllenlas con ae» c iln c a t a l í t i c a sobre le s á s te r e s fe sfé ric o s* *u fo s fa ta s e l a sometemos a d i á l i s i s prolongada ta n to en medio neutro eos» en medie c lo rh íd ric o 0*1 l f lo s cnse» yes re a U sado s en medio acuoso son de des tipos* d i á l i s i s s e n c illa y e le e tr o d lá lie ls * l a a a tir ld a d de l a fo s fa ta s e sometida a d i á l i s i s senq^ l i a disminuye notablem ente y cuando se t r a t a de e le e tro d lá » l i s i e * la enzima» que emigra constantem ente hacia e l cátodo y lle g a a re c u b rir por complete la membrana correspondiente* se ha in a e tlra d e totalm ente aun cuando le s ensayes de acolín ensi m ític a se r e a lic e n en toda l a esc ala de pH y en presen» o la de le s len es cine» n íq u e l y magnesio* Por le que se r e f i e r e a la constancia de le s elem entes m etálicos durante la e l e e tr o d iá l is i s acuosa* se observe que l a fo n fa ta sa d ia lis a d a no deja apenas comisas a l In c in e ra r m ientras que en e l resid u o a sequedad de la s aguas di ái&JL sis * e l a n á lis is e s p e c tra l pene de m an ifieste l a m istenola

• 12* *

atondaste ép ■MMrtty olee* w !» U i IIm w í i t t l i y peto » d£to tontamente •en ente parte a iM tili «siete m e l dial!» 9&$*>f*3U0S# tRJI paralan nitrogenada de «elcr aanto* i« le » Me en ip e * delneidento «en 1» decaparle! dn e»nl te te l del contenido adaeral en la feefatasa dialleada# releeleaede *• «en en aaslfieata iaaetlnaelln» ee etoerva an sanante en a l contenido en nit r ógeno «oaparade ees el de la feefatoaa ein dialloar* I* eleetrodiilisia en aedle a« de m ioleíeidoe y m ic le ítid e e — suelen p e rte n e c e r a sistem as in f e r io r e s y sus puntes da fu* s i l n son muy sem ejantes! a s í l a urldlna» C g l^ g O ^ » a r is ta » l i s a an agujas de alcohol d ilu id a que funden a l i g t (l\

la

c itid in a » ^ ^ 13 ^ 5 *3 # forma agujas que se reblandecen a 220S

Todos lo s nucleÓsidcs y nuoleótidos da que se hadan man* olón e stá n re fe rid o s a la ribosa» (!)* • lávense y Jacobs» B» 43» 3159»

• 129 *

y descomponen a 280* ( l ) | l a tnosina*

tH ita li*

«a s in agua de alco h o l a 80© dando agujas que as d t i e oapi» » nen a 2159 ( t } | la adeno*ifia» Clo^lS^d^S* anida a í { so lio s , l a s de agua» que pierde en e l v a c ila a 110tf y eon ealefae» e ié n ráp id a funden lae ag u jas formadas a 229» ( 3)1 l a x*a% alna» a l ácido in o eín leo as un ja ra b e que ee io2j, d lf ie a per tratam ien to eon alcohol# e l le íd o g uanfllco e r fj| t a l iza en p rie a a e eon doo móldenlas de agua (2)» que p ierd e a 11S© y proeldn o rd in aria » la cual vuelve a tomar de nueve a la tem peratura ambiente» fundiendo la «ubetenela eeea a • 175©» y deoeemponidndoiTO a ISO© ( 3 )» le e nueleéeidoe a n te rio ra » eon b la r o a a ln le e a y en tu to ta lid a d completamente aolmblaa en afqp y más o menee in q f lu b lee en alco h o l ab so lu to ! l a r nuoleleidoa correspondí en— te s son asimismo so lu b le s en agua# Ablentando e s to s oenpneetoa gyl» 66» 133* (6)»* Bang9Beppe*Seyl» 26» 139»

p er •*

• 132 •

le s le íd o s ( l ) y es d ifíc ilm e n te soluble en agua» Al comparar e s te s d ates eon le s de n u e stra s experien­ cias» nos creemos au to rizad o s a e s ta b le c e r bao!Indose a s í * por prim era r e s lfiL.grpfrftttf F&faggJjJBL m slf9 % tiÍ8 X Í* la •co fo afataaa" prosiguiendo lo s tra b a jo s para la determina— e l l n de l a e s tru c tu ra d el compuesto nitrogenado y de la pej| tesa» a s í como de lo s aminoácidos correspondientes de la — •p ro te in a " separada en le e le c tr o d f d lls ls c lo rh íd ric a * So han re a liz a d o por ditim o una s e r le de ex p erien cias de copulación de la "p ro te ln a” separada de la fo s fa ta s e cm una operación llo ra d a a cabo a b a ja tem peratura y e l sólido d e l que se se p a rf l a p a rte m ineral* Beede luego» la unión * de e s te s componentes de la fo rfa ta c a no re sta b le c e a c tiv i­ dad alguna» siendo de ten er p resen te la e s c ie id a que en d compuesto separado en la d i á l i s i s ha tenido lu g ar y la poq¿ b le a lte ra c ió n de l a "p ro te in a ” por e l pH del medie*

(l) * - Levarme y Jacobs»

41» 2706# 44» 749»

* 153 *

PABTX XXPERIMglTAL >■■>»* ■■n— »— C■ni»

1*)*- PIAUSI8 SH MEDIO ACTOS© DB IA FOSFATABA BKX&I»

S« basen primeramente una s e rio ¿o ensayos previos de d i á l i s i s acuosa s e n c illa dorante s e te n ta y dos horas# des** pule se u t i l i z a en la p rá c tic a de la d i á l i s i s de l a fe sfa tfe sa re n al tat e le e tr o d la lis a d e r "deletrea*» Sn la o lía la c e n tra l de la cubeta de d i á l i s i s posesos una cantidad v a ria b le de fo s fa ta s e *0*6 g rs* f 1*5 g rs* t 3*7 g rsf 3 gr*«* en agua d e s tila d a ! la fo s fa ta s e no se d isu elv e en e i l a pero se le g ra te n e r en todo momento una suspensión fcomegánea eon la a g ita c ió n meeAnlca del aparate* Aparente** mente no ae observa cambio alguno en e l aspecto debí fo s fa ­ tase» a s f como tampoco en e l agua que la contiene# la in ten sid ad de l a c o rrie n te que c irc u la es pequeBa p er la escasa conductividad de la so lu ció n y se mantiene un v o lta je de 300 7 durante unas v e in te horas» A p esar de l a * a g ita c ió n y en e l tran scu rso de la d i á l i s is * la fo s fa ta s e * e l una em igración pro g resiva se d ep o sita completamente en l a membrana correspondiente a l cátodo* Al term inar la d i á l i s i s centrifugam os e l contenido de

- 154

la o d íala c e n tra l y la f o s fa ta ra d ts lls a d a la lavases oen alcohol y d te r anhidro*» conservándose en desecador de re»* o ío f e l aspeeto de la fo e fa ta sa a t f d ia llz a d a ee algo d i s ­ tin to d e l qne poseí* con a n te rio rid a d a la e l e e t r o d lá l ls i s f ahora ee mí s eepenjesa9 e l ddhll c o lo r qne en tes p o seía

ee

w eh e míe tdituc y aparentemente ee de b a sta n te menor done i dad* U tilizando e s ta fo sfa ta o s d ia liz e d a ee hacen ana eerle de eneayost A), A ctividad e n z la á tle a opaparada eon la a e e lfa qne peeee id é n tic a fo s fa ta s e o ía eer sometida a la d i á l i s i s seno» aa» a)* - A ctividad de I b f o lf a te e s re n al después d e á d iá li* e le acuosa! Su v p rla e lfn con e l pH* h)* - V arlaeldn de le activ id ad de la fe e fa ta e a re n a l d ia liz a d a p er ineubaeiés durante doce horas coa * 44

Zn

i in flu e n c ia d el pB*

c)* - V aria e ié s de la a c tiv id a d de la fe e fa ta e a re n a l *> d ia liz a d a por lucubaeiéh durante doce horas cea in flu e n c ia del pH d)*- V ariaeidn de la ac tiv id ad de la fo s fa ta s e re n a l ~ d ie liz a d a durante doce horas Incubada con

*

in flu e n c ia d el pH. Se hace a c tu a r l a fo s fa ta s e eohre un su b stra to de g il*

* 135 i4+i/2 0

2 ,0 oo* U)

1

zx

XXX

ff '

r11 S u b strato

6 ce*

8 ee*

• ee.

5 eo»

5 se* taa» pin pH .**

0*52

8,99

9,18

9,64

Feefatoaa d ia lis a d a

1 etg*.

1 etg*.

1 etg*

1 etg*

M «*V20

*e“ v / 2o

Kg+V 2 0

«g*V 20

2 ,0 ee*

\

• m

*

Coando in te rv ie n e n le s l o « i m etálicos han «ido incubados a la tem peratura ambienta durante doce baraa eon la f o s f a ta s e d íalizad a# Cada uno de la te a enrayado» anteriorm ente resobados*

•

tie n e e l eorreependiente u tilia a n d o fe a fa ta a a re n a l a in dia* 11aar* ih a re s que ha terminado la calefaeeién * ee intredneem loe tubos de ensayo en h ie le para suspender la a e e lln de l a ensima y del conjunto bien bomogeneiaade ae toma 1 ee* a l • que se afladen 8*5 ee* de agua d e s tila d a 7 0*5 ee* de le íd o trle lo ro a e é tie e * Se f i l t r a 7 del f i lt r a d o ae toman 5 ee.que ae di layen h a sta s ie te eon agua d e stila d a * ae aftadem lo e

S

ce* correspondientes de ao llb d ato amdnleo a l 5 Í en SO^H^SX* hidroquinona a l 1 % 7 a u lf lto sádico a l 20 í y se v alo ra ee* 1orím étricam ente e l fo sfo ro lib erad o a lo s t r e i n t a minutos de la a d ie iln de lo s re a e tlro e en colorím etro fo to e lé e trio o * lo a re su ltad o s obtenidos aont

«ffigi.Ua «ctw. P/co» I ..... II . . . . .

0 ,0 * 0,8620

% ; 4 ,4

Rl só lid o de co lo r marrón se d isu elv e b ien en agua pe* re la d iso lu ció n no es e s ta b le sino que se forman p ro g re si-

* 141 *

▼ámente p recip itad o s* dicha su b stan cia dá I p o sitiv o y en cambio in v estig ad a l a p resencia de fá a fo ro en en soluelán acuosa eon m olibdato en medie n í t r i c a da re sa lta d o nea^tf» rp* Tanto la so lu elán acuosa eome una so lu elán c lo rh íd ric a t e e s ta su stan cia calen tad a a r e f lu jo durante t r e i n t a ning. t e s no presentan poder red u cto r alguna f re n te a l Ü e c r de T ehlingi ac f come tampoco cuidadosamente tra ta d a c e ta frqfc c ián nitrogenada con n i t r i t o sádico y ácido c lo rh íd ric o ex perlm enta» reacciones que hubiesen puesto de m an ifieste l a p resen cia de grupos **% aromáticos# Con o b jeto de r e c lin a r un e stu d io de lo s elementos dd t á lle o s separados de la fo s fa ta s e en la e l e c tr o d iá l is i s ** acuosa mediante a n á lis is e sp e c tra l* evaporamos totalm ente a sequedad la s aguas de d i á l i s i s a l bailo toaría en re e ip ie ji te s adecuados* obteniéndose asimismo un residuo como come* puesta de dos p a rte e s una completamente blanca de aspecto c r is t a l i n o en e l fondo y o tra de c o lo r marrén que forma e& mo e s tr a to s en e l re c ip ie n te » Cantidad de residuos he 0*7210 grs* de fo s fa ta s e se obtienen 0*0784 grs# de residuo to ta l# Cna p a rte de e s te residuo to t a l l e incineramos en e ri* so l de p la tin e dando abundantes cenizas blancas con la s que se r e a l is a un espectrogram a con a rre g lo a l sig u ie n te seque* mat

• 142 *

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